HyPure組織細胞RNA/DNA/Protein分離提取

HyPure組織細胞RNA/DNA/Protein分離提取試劑盒，適用于快速從同一個動物細胞或者組織樣品中同時提取分離基因組DNA和總RNA和Protein，不需要使用DNase消化，RNA可直接用于反轉錄PCR，熒光定量PCR。無需有毒的苯酚/氯仿抽提/乙醇沉淀等步驟，基因組DNA清除柱有效清除gDNA殘留，無需DNase消化，無DNA殘留，也無雜質殘留，RNA純度*，適合于對純度要求很高的下游實驗，如real-time RT-PCR和RNA-Seq。

HyPure™組織細胞RNA/DNA/Protein分離提取試劑盒(離心柱型)

HyPure™ Tissue&Cell RNA/DNA/Protein Kit

包裝規格：

本產品僅用于科研，禁止用于醫藥、臨床醫療、食品和化妝品等用途。

產品介紹：
HyPure™組織細胞RNA/DNA/Protein分離提取試劑盒，可快速從同一個動物細胞或者組織樣品中同時提取DNA、RNA和Protein。無需苯酚、氯仿等有機試劑。用*的裂解液迅速裂解細胞和滅活細胞RNA/DNA酶，通過基因組DNA吸附柱時，DNA會吸附在吸附柱內，而RNA和Protein會濾過，通過后續的多次柱漂洗的方式?？稍?0分鐘左右，同時提取純度高，沒有雜質污染，互不干擾的DNA、RNA和Protein。

得到的RNA產物可用于RT-PCR、Real Time PCR、Northern blot、Dot blot、poly A篩選、體外翻譯、構建cDNA文庫等各種分子生物學實驗?；蚪MDNA也可用于下游的Southern、酶切、PCR等各種試驗。Protein可用于SDS-PAGE電泳或者western blot 等試驗。

產品特點：

無污染：整套試劑盒采用RNase-Free處理。

特殊性：適用于動物組織和培養細胞，可同時提取互不干擾的總RNA和基因組DNA。

易操作：操作簡便，提取過程僅需 60分鐘左右。

安全性：無需使用苯酚、氯仿等有機試劑。

吸附柱：含有特異性吸附柱。通過漂洗－離心－洗脫的步驟提取。

高質量：有效保證RNA/DNA/Protein的完整性，回收RNA /DNA/Protein效率高，純度高，沒有蛋白和其他雜質污染?？捎糜诟鞣N分子生物學實驗。

操作步驟：（實驗前請先閱讀注意事項）

洗脫緩沖液EB在65°C~70°C水浴鍋中預熱，效果更佳。

樣品處理：

1.動物組織：取新鮮或－80°C凍存動物組織盡量剪碎，加入350μl（< 20mg組織）或600μl （20 ~ 30mg組織）的裂解液RLT，勻漿儀進行勻漿處理?；蛟谝旱醒心コ杉毞酆?，取研磨組織細粉(20mg/30mg)轉入裝有350μl/600μl組織裂解液RLT的1.5ml離心管中，劇烈振蕩混勻或者200μl吸頭吹打混勻。

2.貼壁細胞：直接在培養板中加入裂解液RLT裂解細胞，按培養板面積每10cm2加1ml裂解液RLT，用取樣器吹打混勻。用移液器反復吹打， 直到看不到明顯的細胞團為止。裂解液加入量不足會有DNA污染。

3.懸浮細胞：離心收集細胞。加入350μl裂解液RLT（<5×106細胞）或者600μl裂解液RLT（5×106 ~ 1×107細胞）。 用移液器反復吹打，直到看不到明顯的細胞團為止。不需要洗滌，避免mRNA降解。

提取步驟：

1.將處理后的樣品在室溫靜置5~10分鐘，13,000rpm離心3分鐘，會有雜質沉淀。

2.將上清液轉入套有基因組DNA吸附柱DA的離心管中。（不要吸取、沉淀物和漂浮物。漂浮物可能會黏附在槍頭的外壁，注意不能將其帶入離心管中。）

3.13,000 rpm離心60秒，保留濾過液（RNA和Protein在過濾液中）、吸附柱DA（DNA在吸附柱中）。

（此時將分開實驗，建議先提取RNA，吸附柱DA短時間可存放4°C度備用。Protein提取從RNA提取步驟5中分離。）

提取RNA步驟：

4.估計濾過液體積，加入等體積的70%乙醇（請先檢查是否已加入無水乙醇），立即吹打混勻。

5.將混合溶液（每次小于700μl）滴入套有吸附柱RA的離心管中，13,000 rpm離心30秒。（保留濾過液以備提取Protein）

6.將吸附柱RA套入新的離心管中，加700μl 去蛋白液RW1，室溫靜置1分鐘，12，000rpm 離心30秒，棄掉廢液。

7.加入500μl漂洗液RW（請先檢查是否已加入無水乙醇），12,000 rpm 離心30秒，棄掉廢液。

8.重復步驟7一次。

9.將吸附柱RA放回收集管中，13,000 rpm離心2分鐘，盡量除去漂洗液，以免漂洗液中殘留乙醇抑制下游反應，棄掉廢管。

10.取出吸附柱RA（避免吸附柱RA的底部碰到收集管里面的廢液），放入新的RNase - free離心管中，在吸附膜的中間部位加30 ~ 50μl RNase-free H2O室溫靜置1分鐘，12,000 rpm 離心1分鐘。洗脫后的RNA可立即使用或保存在－80°C,防止降解。

提取DNA步驟：

11.在步驟3的吸附柱DA上加入500μl抑制物去除液IR，12,000rpm 離心30秒，棄掉廢液。

12.加入700μl漂洗液WB（請先檢查是否已加入無水乙醇），12,000rpm 離心30秒，棄掉廢液。

13.加入500μl漂洗液WB，12,000rpm 離心30秒，棄掉廢液。

14.將DNA吸附柱DA放入收集管中，13,000rpm離心2分鐘，盡量除去漂洗液，以免漂洗液中殘留乙醇抑制下游反應。

15.取出DA吸附柱（避免吸附柱DA的底部碰到收集管里面的廢液），放入一個干凈的離心管中，在吸附膜的中間部位加100μl洗脫緩沖液EB， 室溫靜置3 ~ 5分鐘，12,000rpm 離心1分鐘。將得到的溶液重新加入離心吸附柱 中，室溫靜置2分鐘，12,000rpm離心1分鐘。洗脫后的DNA可立即使用或保存在－20°C，防止降解。

提取Protein步驟：

16.將步驟5的濾過液中加入濾過液等體積的緩沖液APP，渦旋振蕩混勻，室溫靜置15分鐘沉淀Protein。

17.13,000rpm離心5~10分鐘，小心棄上清。加入500μl 70%乙醇（請先檢查是否已加入無水乙醇），顛倒后離心1分鐘，留下蛋白沉淀，盡量將上清液體用移液器吸干凈。

18.室溫晾干沉淀5~10分鐘，讓乙醇揮發干凈，以免下影響游試驗。

19.將蛋白沉淀溶解于30~150μl 1×蛋白上樣緩沖液或其它下游試驗要求的緩沖液。

20.95°C放置5分鐘溶解和變性蛋白，回復到室溫，最高速離心1分鐘。

HyPure組織細胞RNA/DNA/Protein分離提取試劑盒